CCK8實(shí)驗(yàn)是一種基于比色法的細(xì)胞增殖和毒性檢測(cè)方法，廣泛應(yīng)用于藥物篩選、細(xì)胞活力評(píng)估等領(lǐng)域。其實(shí)驗(yàn)原理是通過(guò)WST-8試劑與活細(xì)胞線粒體脫氫酶反應(yīng)生成水溶性橙黃色甲臜，其生成量與活細(xì)胞數(shù)量成正比，通過(guò)檢測(cè)450 nm波長(zhǎng)處的吸光度（OD值）間接反映細(xì)胞活性。

實(shí)驗(yàn)步驟（以96孔板為例）：

1. 細(xì)胞接種：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞以適當(dāng)密度（如4×103~6×103個(gè)/孔）接種至96孔板，確保均勻分布。

2. 藥物處理：根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)加入不同濃度的藥物或待測(cè)物質(zhì)，設(shè)置對(duì)照組（如wan全培養(yǎng)基）和復(fù)孔（通常3個(gè)/組）。

3. 孵育：在37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中孵育特定時(shí)間（如24~72小時(shí)），部分實(shí)驗(yàn)需中途更換培養(yǎng)基。

4. 添加CCK8試劑：每孔加入1/10體積的CCK8溶液（如10 μL），避光孵育1~4小時(shí)（時(shí)間需優(yōu)化）。

5. 檢測(cè)OD值：使用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，記錄數(shù)據(jù)并繪制生長(zhǎng)曲線。

注意事項(xiàng)：

• 試劑保存：CCK8試劑需避光保存于4℃，避免反復(fù)凍融；含強(qiáng)還原劑（如維生素C）的培養(yǎng)基可能干擾結(jié)果。

• 操作規(guī)范：加入試劑后避免晃動(dòng)培養(yǎng)板，防止細(xì)胞脫落；確保細(xì)胞充分貼壁且密度適中。

• 標(biāo)準(zhǔn)化：建議預(yù)先繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，校準(zhǔn)細(xì)胞數(shù)量與OD值關(guān)系，并控制孵育時(shí)間以提高重復(fù)性。

• 數(shù)據(jù)解讀：需結(jié)合統(tǒng)計(jì)分析（如t檢驗(yàn)或ANOVA），關(guān)注藥物濃度與細(xì)胞活力的相關(guān)性，并排除實(shí)驗(yàn)干擾因素。