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細(xì)胞增殖到底用MTT還是CCK8呢?

更新時(shí)間:2017-11-30點(diǎn)擊次數(shù):10907

MTT增殖曲線,基本上就是基礎(chǔ)的功能實(shí)驗(yàn)了,養(yǎng)過細(xì)胞的你應(yīng)該都會做。

但是,要怎么樣才能省時(shí)省力呢?你也知道,如果用MTT的話,加入10ul的MTT后要等四個(gè)小時(shí),在活細(xì)胞的線粒體中形成甲囋,然后在把培養(yǎng)基吸掉,再加上DMSO溶解,進(jìn)行檢測。

這個(gè)方法是常用的MTT方法,但是會有三個(gè)問題,*個(gè)是有的甲囋不容易溶解。

還有一個(gè)問題就是,由于要讓DMSO充分溶解甲囋,所以會要混勻,就會產(chǎn)生泡沫,影響酶標(biāo)儀讀值:

第三個(gè)問題,就是在吸去培養(yǎng)基的時(shí)候,容易把甲囋也吸走,導(dǎo)致終讀值不準(zhǔn)。

當(dāng)然也不是沒有辦法的,這篇文獻(xiàn)中提到在DMSO中加入8到800mM的氨的堿性DMSO能更快更好地溶解甲囋:

當(dāng)然,這個(gè)也是有人親測可用的。不過,我們還是來談?wù)劻硪环N溶劑哈,就是傳說中的三聯(lián)液,這個(gè)其實(shí)是1983年Mosmann大神*次發(fā)明MTT法時(shí)所采用的溶解液:

初的版本是酸化異丙醇,也就是加入了0.04N的鹽酸的異丙醇。但是后來又衍生成為了:SDS10g,異丁醇5ml,0.1ml的10M HCl,用雙蒸水溶解配成100ml溶液,這就是三聯(lián)液。

三聯(lián)液的優(yōu)點(diǎn)在于不用吸去培養(yǎng)基,當(dāng)然,缺點(diǎn)就是要溶解很久。不過加完三聯(lián)液后可以過夜,第二天再測。

還有一種檢測方法也很常見,就是CCK8,和MTT的區(qū)別就在于……貴。比如MTT要5分錢,CCK8差不多就5毛……還有一點(diǎn)就是,CCK8會形成水溶性的橙色甲囋,MTT形成的是紫色的有機(jī)溶劑溶解的甲囋。

所以CCK8加入后,就直接等4小時(shí)左右,讓橙色甲囋溶解到培養(yǎng)基就能檢測了。而MTT,就需要用DMSO再溶解出來……

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