輸尿管內(nèi)置管建立兔單側(cè)輸尿管梗阻腎小管間質(zhì)纖維化模型

(1)復(fù)制方法  體重2～3kg新西蘭兔，經(jīng)靜脈按30mg/kg體重的劑量注射戊丨巴丨比丨妥丨鈉麻醉，動(dòng)物仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，腹部皮膚常規(guī)消毒、去毛。作臍下腹直肌外側(cè)旁直切口，切開腹外斜肌腱膜，暴露腹內(nèi)斜肌，分開腹橫肌，向內(nèi)側(cè)推開腹膜，鈍性分離腹膜，在髂血管前找到輸尿管，游離輸尿管，用艾利斯(Allis)鉗固定輸尿管，用剪刀剪開輸尿管1/3管徑(此處距離腎盂4～5cm)，將F2導(dǎo)管向輸尿管近端逆行插入2～3cm，可見到尿液經(jīng)導(dǎo)管流出，用1號(hào)絲線結(jié)扎輸尿管遠(yuǎn)端，固定輸尿管及導(dǎo)管，將導(dǎo)管遠(yuǎn)端結(jié)扎閉合，埋藏于皮下，以備收集標(biāo)本用。按120～150mg/kg體重劑量，分別在預(yù)定時(shí)間經(jīng)靜脈給模型兔注射3％的菊糖溶液。然后取梗阻側(cè)的腎盂尿，無梗阻側(cè)的腎盂尿，血液標(biāo)本，作菊糖濃度，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)濃度測(cè)定；并處死動(dòng)物，取腎臟標(biāo)本，經(jīng)10％甲醛固定，作常規(guī)石蠟組織切片，HE染色，光鏡下觀察。

(2)模型特點(diǎn)  術(shù)后模型動(dòng)物梗阻側(cè)尿液中菊糖濃度明顯低于正常值；而梗阻側(cè)尿液中TGF-β1濃度則明顯高于正常側(cè)，表明梗阻側(cè)腎臟功能受損害，且分泌TGF-β1顯著增加。模型動(dòng)物肉眼大體觀察梗阻側(cè)腎臟體積較正常增大，腎盂、腎盞擴(kuò)大，輸尿管增粗，管腔擴(kuò)大。鏡下病理組織學(xué)觀察顯示，梗阻側(cè)腎臟腎皮質(zhì)部分間質(zhì)充血、水腫，同時(shí)伴有數(shù)量不等的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；腎髓質(zhì)間質(zhì)充血、水腫，并可見不同程度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；腎小球及腎小管組織形態(tài)基本正常，無明顯改變。本模型梗阻早期，腎臟病變主要以腎間質(zhì)炎癥、充血、水腫為主；中后期則可出現(xiàn)腎臟間質(zhì)纖維化，腎功能損害，腎小球逐漸萎縮，被薄層纖維組織替代。模型動(dòng)物梗阻側(cè)腎臟尿液菊糖濃度變化可準(zhǔn)確反映腎小球?yàn)V過率降低的病理變化；腎臟組織纖維化形成過程中TGF-β1可持續(xù)過度表達(dá)。本模型方法簡(jiǎn)單，實(shí)用性強(qiáng)，易于標(biāo)本反復(fù)收集，可用于動(dòng)態(tài)研究。本模型制作過程中，導(dǎo)管插入長(zhǎng)度應(yīng)控制在2～3cm之間，避免因插入過長(zhǎng)造成腎盂黏膜膜及腎實(shí)質(zhì)損傷，導(dǎo)致腎盂內(nèi)積血或感染，而使模型制作失敗。

(3)比較醫(yī)學(xué)  單側(cè)輸尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)腎損傷模型以進(jìn)行性腎小管間質(zhì)纖維化為其主要特征，并伴有散在腎小球病變，但無高血壓和脂質(zhì)代謝異常。臨床上單側(cè)輸尿管梗阻可由許多疾病引起，隨著病程的不斷發(fā)展，可引起不同程度的腎功能損害，直至腎功能喪失。腎小球及腎小管間質(zhì)纖維化，其直接原因是多種細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)成分的積聚，如：纖黏蛋白(FN)，Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原，硫酸表皮素蛋白多糖(Biglycan)等多種蛋白多糖的積聚。一系列生長(zhǎng)因子與細(xì)胞因子的改變與這些ECM成分的合成及代謝的調(diào)節(jié)密切相關(guān)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)是其中重要的細(xì)胞因子之一。TGF-β1通過受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)促進(jìn)細(xì)胞合成膠原蛋白、纖維蛋白、層蛋白以及蛋白多糖等，調(diào)節(jié)組織正常的損傷修復(fù)，其過量生成則與慢性纖維化有關(guān)。本模型通過改進(jìn)傳統(tǒng)的單一性輸尿管結(jié)扎的方法，采用輸尿管內(nèi)置管制備單側(cè)輸尿管梗阻，同樣可獲得與傳統(tǒng)手術(shù)方法制備的相同的梗阻動(dòng)物模型，且腎功能損害、纖維化病變特征典型，并證實(shí)模型動(dòng)物可出現(xiàn)菊糖濃度降低及 TGF-β1濃度升高，可用于腎小管間質(zhì)纖維化發(fā)病機(jī)制、藥物治療方面的動(dòng)態(tài)、重復(fù)性研究。