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ELISA試劑盒試驗步驟詳解

更新時間:2017-12-08點擊次數(shù):3587
   ELISA試劑盒可用于測定抗原,也可用于測定抗體,ELISA試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗體ELISA檢測。因為其試劑不亂、易保留,操縱簡便,結(jié)果判定較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢修的各領(lǐng)域中。

ELISA試劑盒

  ELISA試劑盒試驗步驟詳解
  1、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在上海恒遠生物白介素ELISA試劑盒酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  2、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
  3、配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  4、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
  5、溫育:操作同3。
  6、洗滌:操作同5。
  7、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  8、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
  9、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
  10、計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
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