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Elisa試劑盒試驗過程中需要特別注意的細節(jié)

更新時間:2017-08-08點擊次數(shù):2232
  Elisa試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)、已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。
      Elisa試劑盒試驗過程中需要特別注意的細節(jié)
  1、試劑準備:試劑都在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中使用一次性吸頭,避免交叉污染;
  2.加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免*孔與后一孔之見的時間間隔過大,否則將會導致不同的預孵育時間,從而影響實驗的準確性以及重復性;一般加樣時間控制在10分鐘內,如果樣本數(shù)量過多,可使用多道移液器;
  3、建議實驗前預測樣品含量,如樣品濃度過高,應對樣品進行稀釋,計算結果時乘以相應的稀釋倍數(shù);
  4、洗滌:洗滌過程中反應孔中的殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響后的酶標儀讀數(shù);
  5、反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應;
  6、孵育:樣品要在密閉的容器內進行孵育,嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行;
  7、建議使用本試劑盒時先做預實驗(即先做標準曲線,試用幾個標本),如果對本試劑盒有疑問,可與廠家咨詢
  Elisa試劑盒是免疫診斷中的一項新技術,現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經使用的結果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大。
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