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結締組織類細胞培養(yǎng)

更新時間:2017-07-31點擊次數(shù):2568

一、成纖維細胞培養(yǎng)

用人或動物胚體為好;動物可用小鼠或雞胚,去頭和內臟,剪成小碎塊后,用胰蛋白酶消化法培養(yǎng);如為人胚,可取皮膚培養(yǎng)。幼兒包皮是培養(yǎng)成纖維細胞的很好對象。

二、巨噬細胞培養(yǎng)

1.實驗前三天,向每只小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml(勿注入腸內)。

2.引頸殺死動物,手提鼠尾將全鼠浸入70%酒精中3~5秒。

3.置動物于解剖臺上,用針頭固定四肢,雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側,暴露出腹膜,但勿傷及腹膜壁。

4.再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中,同時從兩側用手指揉壓腹膜壁,令液體在腹腔內充分流動。

5.用針頭輕輕挑起腹壁,使動物體微傾向一側,使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內。

6.小心拔出針頭,把液體注入離心管中,250g 4℃離心10分鐘,去上清,加10 ml Eagle培養(yǎng)基。

7.計數(shù)細胞,每只小鼠可產生20~30×105細胞,其中90%為巨噬細胞。

8.為獲取3×105個帖附細胞/平方厘米,需接種2.5×106/ml。

9.為純化培養(yǎng)細胞,去除其它白細胞,在細胞培養(yǎng)接種數(shù)小時后,去除培養(yǎng)液,用Eagle液沖洗1~2次后,再加新Eagle培養(yǎng)液置37℃ CO2溫箱中培養(yǎng)。

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